培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、器皿或其他容器，生存空間及營(yíng)養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖到一定密度后，分離出一部分細(xì)胞和更新?tīng)I(yíng)養(yǎng)液，使細(xì)胞更好地生存，這一過(guò)程稱之為“傳代"(passage或subculture)。

值得注意的是：每次傳代細(xì)胞在生長(zhǎng)和增殖方面受到一定的影響。

生命期

指細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間。一般根據(jù)細(xì)胞種類、性狀和原供體的年齡的情況而定。

如：二倍體成纖維細(xì)胞，在不凍存和反復(fù)傳代條件下可傳30～50代，相當(dāng)于150～300個(gè)細(xì)胞增殖周期，能維持一年左右的生命，細(xì)胞便開(kāi)始凋亡(apoptosis)。 細(xì)胞在生存過(guò)程中經(jīng)歷以下三個(gè)階段

1.原代培養(yǎng)期(primary culture)

細(xì)胞培養(yǎng)

組織到第一次傳代時(shí)間大約為1～4周

特點(diǎn)：

細(xì)胞移動(dòng)活躍,但分裂不旺盛,多呈二倍體核型。

原代與體內(nèi)原組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)基本相似。

各細(xì)胞的遺傳性狀互不相關(guān)，細(xì)胞相互依存性強(qiáng)，如果把這種稀釋分散成單細(xì)胞,在軟瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),細(xì)胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降，表明細(xì)胞獨(dú)立生存性差。

2.傳代期(passage)

初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代便稱之為細(xì)胞系(cell line)

特點(diǎn)：

細(xì)胞增殖旺盛，并維持二倍體核型，也叫二倍體細(xì)胞系(diploid cell line)為了保存二倍體細(xì)胞性質(zhì)，細(xì)胞應(yīng)在初代或傳代早期凍存為好。

一般細(xì)胞在10代以內(nèi)凍存。

凍存配方：

向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑二甲基亞砜(DMSO)或甘油,封入安瓶中。

存于在液氮中溫度可達(dá)到－196℃，可長(zhǎng)期儲(chǔ)存。如解凍后細(xì)胞復(fù)蘇，仍能繼續(xù)增殖生長(zhǎng)，細(xì)胞性狀不受影響，成為保存細(xì)胞最主要的手段。

3.衰退期

特點(diǎn)：細(xì)胞仍生存 增殖減慢 不增殖 輪廓增強(qiáng) 衰退凋亡

注意：細(xì)胞在三期中的任何一期（一般發(fā)生在傳代后期或衰退期）在某些因素影響下,如血清質(zhì)量不佳、病毒污染、溫度和pH不穩(wěn)等,細(xì)胞可能發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化(spontaneous transformation);

細(xì)胞可能獲得永生性(immortality) 或稱為惡性性(malignancy)。細(xì)胞獲得持久性的增殖能力,這樣的細(xì)胞群體稱為連續(xù)細(xì)胞系(continuous cell line)。而細(xì)胞獲得不死性后,細(xì)胞核型大多變成異倍體(heteroploid)接觸抑制消失。

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